CFSE Protokoller

CFSE, eller karboksyfluorescein-succinimidyl-ester, er en fluoriserende celle fargeløsning som anvendt i lymfocyttmigrering studier. Lymfocytter er blodets hvite celler som har evnen til å bevege seg ut av blodet til å fange fremmede mikroorganismer, spiller en viktig rolle i immunforsvaret. CFSE kan også brukes til å merke thymocytter og embryonale celler, i henhold til "Immunology and Cell Biology".

Menneskelig Lymphocite Farging Protocol

Teknikere fremstille en cellesuspensjon med 20 millioner celler per ml i 0,1 prosent fetalt bovint serum (FBS) og fosfatbufret saltløsning (PBS). De legger CFSE og la suspensjon sitte i åtte minutter, ifølge The University of Kansas Medical Center. Forvarmet FBS blir deretter tilsatt og cellene inkubert i et vannbad ved 98,6 grader Fahrenheit i 10 minutter. Cellene blir deretter sentrifugert i fem minutter, supernatanten kastet og cellene ble vasket i en oppløsning av 2 prosent FBS / PBS tre ganger. Cellene er festet med paraformaldehyde.

Forenklet CFSE Farging Protocol

Teknikere sentrifuger blodprøver, eliminere de røde blodcellene. Senere, de vasker lymfocyttene med PBS for å fjerne fritt protein. For å være i stand til å observere celledeling etter to dager, CFSE tilsatt i lave konsentrasjoner i åtte minutter, hvoretter reaksjonen blokkert med føtalt kalveserum. Cellene vaskes to ganger med PBS / FCS. Denne protokollen kan bli brukt i "in vivo" eller "in vitro" forsøk, i henhold til den Hedrick Lab ved University of California.

Protokoll for aktivering av Naive CD8 T-celler in vitro

En naiv T-celle er en lymfocytt som har differensiert i benmargen. Denne celletypen er moden, og cellene svare på nye patogener at immunsystemet aldri har møtt. Teknikere inkuber influensavirus og celleprøver på is i 30 minutter, sentrifuger og fortsette inkubasjonen prosessen i 18 timer ved 98,6 grader Fahrenheit. Senere ble cellene farget med CFSE og resultatene er analysert under strømningscytometri.