Hvordan overvåke cellevekst

Forskere rutinemessig cellevekst. Det kan være en del av regulær celle vedlikehold, eller som en del av et eksperiment. For eksempel kan et eksperiment settes opp for å sammenligne effekten av tre forskjellige medikamenter på veksten av celler. I dette tilfelle er fire kolber av celler ved den samme konsentrasjon satt opp; en uten noen medikamenter som en kontroll, og en for hver av de tre medikamenter. Cellene ble fjernet fra kolbene med jevne mellomrom, for eksempel daglig, telles og registreres. De celleantall er plottet på en grafisk fremstilling med tiden; virkningen av medikamentene på cellevekst kan bli sammenlignet med kontrollen.

Bruksanvisning

celler

1 Virvel-celler forsiktig for å få en jevn suspensjon. Fjerne et volum av celler, slik som 1,0 milliliter (ml), med en pipette og overføres til et prøverør. Fortynn celler for å gi 100.000 til 500.000 celler per ml - dette bør gi de ca 100 celler kreves for statistisk signifikans når man teller.

2 Fortynn cellene, om nødvendig, ved tilsetning av 9,0 ml av medium til 1,0 ml celler. Bland og registrere fortynning. Hvis cellene er fortsatt altfor konsentrert, fjerne 1,0 ml fortynnet celler til et nytt rør, tilsett 9,0 ml medium, blande og registrere fortynning. Pattedyrceller vokser vanligvis i området fra 100.000 til 5 millioner per ml, så 0 til 2 fortynninger bør være tilstrekkelig.

3 Bland cellene fra den endelige fortynning. Fjerne et lite volum, for eksempel 0,1 ml, og plasser i et nytt rør. Legge til et likt volum av trypanblått, bland og registrere fortynning. Døde celler tar opp trypanblått og vil vises blått under mikroskopet.

telle

4 Polere hemacytometer og dekkglass med linsepapir, og legg dekkglass på hemocytameter rutenett. Tilsett en dråpe fortynnet celler til den V-form ved siden av risten. Celler bevege seg under dekkglass ved kapillærvirkning.

5 Plasser lysbildet på mikroskopet, fokusere på nettet og bruke hånd tally telleren å telle levedyktige, ikke blå, celler. Cellene skal ikke overlappe hverandre; hvis for tett, utføre en annen fortynning. Hvis cellene er for tynn, forberede en mer konsentrert prøve.

6 Fjern hemacytometer, ren, laste, og telle på nytt. Telle hver celleprøve tre ganger.

beregning

7 Beregn det antall celler pr ml. Den hemacytometer gitter er delt i 9 store kvadrater, hver med et volum på 0,1 ml.

8 Del antall celler telles med antall store rutene brukes (ni hvis du bruker hele rutenettet), og multipliser med 10 000 for å få celler per ml. Multipliser med fortynningsfaktoren (e) for den endelige konsentrasjonen.

9 Noter dato, sample, celletall, fortynning faktorer og slutt celle nummer per ml. Forbered en graf av celletall plottet mot tiden for å vise cellevekst.