Lentiviral Emballasje Protocol

Forskere bruker lentiviral vektorer til genetisk ingeniør celler. Som modifisert lentivirus, i stedet for å levere sitt eget genetiske informasjon når de infiserer en celle, gir de et gen av interesse som blir en del av det cellulære DNA, uttrykt av cellen.

lentivirus

Når lentivirus gener integreres inn i cellens DNA, produserer celleproteiner for å lage flere viruspartikler. Disse virale proteiner selv montere og bli virale kapsider - det ytre virus skallet. Cellen gjør også en del av RNA som inneholder de gener som er nødvendige for å lage flere viruspartikler. Dette RNA har en spesiell emballasje sekvens som partikkel proteiner gjenkjenne og pakke inne i kapsid. Partiklene avslutte cellene, infisere nye celler og gjentar syklusen.

emballasje

Forskere bruker denne pakkeprosessen å lure modifiserte viruspartikler inn i emballasje et gen av interesse, for eksempel grønt fluorescerende protein (GFP). De skaper et stykke av DNA - et plasmid som - inneholdende bare emballasjen signal og GFP-genet. Separate plasmider inneholder gener for å lage flere partikler.

transfeksjon

Plasmider blandet i et lipid eller saltoppløsningen er plassert på celler som absorberer DNA og gjør viruspartikler for innsamling fra vekstmediet. Partiklene, som bare inneholder gensekvensen for GFP, kan infisere andre celler som deretter uttrykker GFP. Disse cellene har ikke fått gener for å lage flere virus, men så ingen virusreplikasjon inntreffer.