Luciferaserapportørplasmid Assay Protocol

Lyset produsert av ildfluer har blitt et viktig verktøy for molekylærbiologer. Firefly bio-luminescens - produsert av luciferase konvertering av luciferin til oxyluciferin - ble først identifisert, karakterisert og utviklet seg til luciferase reporter analysen av forskere ved University of California, San Diego, i 1986.

definisjoner

Deoksyribonukleinsyre (DNA) tjener som genetisk materiale i cellene. En promotorsekvens av DNA som regulerer ekspresjonen av et gen - en sekvens av DNA som produserer et spesifikt protein. Som et eget stykke DNA, inneholder et plasmid et gen, slik som luciferase.

metoder

En forsker konstruerer et plasmid som inneholder en promoter og luciferasegenet. Dette plasmidet blir transfektert - innføres biologisk, kjemisk eller mekanisk - inn i en dyrecelle, og senere at cellens brytes opp for å frigjøre ethvert produsert luciferase. Luciferin tilsettes til denne celle blandingen, og mengden av bio-luminescens produsert av luciferase omdannelse av luciferin til oxyluciferin blir målt. Kits og detaljerte protokoller er kommersielt tilgjengelige for denne analysen.

Bruker

Mengden av bio-luminescens som produseres i denne analysen er proporsjonal med styrken av promoteren, og således tjener som en nyttig metode for å sammenligne forskjellige promotere. Dette blir viktig i industrielle innstillinger, som er optimalisert arrangører kunne øke mengden av protein som produseres i samme tidsperiode.